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PREVENTION AND CONTROL

藥敏試驗操作方法
發布時間:2016-12-22

藥敏試驗根據美國臨床標准委員會(NCCLS)推薦的K-B瓊脂法進行,藥敏紙片選擇中國生物制品鑒定所藥敏紙片,試驗所選擇藥物必須包括下列抗生素:氨苄西林(AMP),阿莫西林/克拉維酸(AMC),頭孢噻吩(CFT),頭孢噻肟(CTX),慶大黴素(GEN),萘啶酸(NAL),諾氟沙星(NOR),四環素(TBT),利福平(RFA),複方新喏明(SMZ)。

1 操作方法:

(1)將待檢菌接種于普通營養瓊脂平板,37℃培養16~18小時,然後挑取普通營養瓊脂平板上的純培養菌落,懸于3ml生理鹽水中,混勻後與菌液比濁管比濁。以有黑字的白紙爲背景,調整濁度與比濁管(0.5麥氏單位)相同。

(2)用無菌棉拭子蘸取菌液,在管壁上擠壓去掉多余菌液。用棉拭子塗布整個M-H培養基表面,反複幾次,每次將平板旋轉60度,最後沿周邊繞兩圈,保證塗均勻。

(3)待平板上的水分被瓊脂完全吸收後再貼紙片。用無菌鑷子取藥敏紙片貼在平板表面,紙片一貼就不可再拿起。每個平板貼5張紙片,每張紙片間距不少于24mm,紙片中心距平皿邊緣不少于15mm。在菌接種後15分鍾內貼完紙片。

(4)將平板反轉,孵育18~24小時後取出,用遊標卡尺測量抑菌圈直徑,從平板背面測量最接近的整數毫米數並記錄(附表5)。抑菌環的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長爲限。有的菌株可出現蔓延生長,進入抑菌環,磺胺藥在抑菌環內出現輕微生長,這些都不作爲抑菌環的邊緣。結果判斷依據鑒定所藥敏紙片判定標准。

2 注意事项:

(1)制備MH瓊脂平板應用直徑90mm平皿,在水平的實驗台上傾注。瓊脂厚爲4±0.5mm(約25-30ml培養基),瓊脂凝固後塑料包裝放4℃保存,在5日內用完,使用前應在37℃培養箱烤幹平皿表面水滴。傾注平皿前應用pH計測pH值是否正確(pH應爲7.3)。pH過低會導致氨基糖苷類,大環內酯類失效,而青黴素活力增強。

(2) 药敏纸片长期储存应于-20℃,日常使用的小量纸片可放在4℃,但应至于含干燥剂的密封容器内。使用时从低温取出后,放置平衡到室温后才可打开,用完后应立即将纸片放回冰箱内的密封容器内。 过期纸片不能使用, 应弃去。

(3) 不稳定药物如亚胺培南, 头孢克洛, 克拉维酸复合药等, 应冷冻保存, 最好在-40 ℃以下。

(4) 保证质控菌株不变异的简便方法,将新得到的冻干菌株接种含血的M-H平板复活。然后每株细菌接种10支高层琼脂管,放置冰箱保存。每月取出一支,传出细菌供常规用。待用剩至最后一支,可传种在M-H平板上,再接种一批高层琼脂管备用。如此可保证原始菌种永不接触抗菌素。

3質量控制:

(1)質量控制方法 


是用與常規實驗相同的操作方法,測定質控菌株的抑菌環。應使用新鮮傳代的菌種。接種菌液的塗布方法等均同常規操作,測定的抗菌素種類也應與常規測定的種類相同。按表2所列的數據測定相應菌株的抑菌環,並記錄結果。

(2)質控試驗頻率


用新一批MH琼脂或新抗生素纸片时做质控。每日试验时, 同时做质控—监测系统整体质量。在每日合格的基础上,可改为每周做。一个药物/细菌组合连续30天的抑菌圈直径结果中, 超出准确质控范围的不多于3个,如符合要求, 每一质控菌株可以每周进行质控而不必每日进行。

(3)失控

一旦发现失控,应从培养基、纸片、接种菌液等方面去查找原因,并及时纠正。无明显错误而出现失控结果时要恢复每天质控, 直至找到错误原因并提出解决办法为止;用合适质控菌株连续测试5天, 所有5个抑菌圈直径都在允许范围内;恢复每周作之前,应有30个试验日有满意结果。


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